The relation of ethambutol resistance to embB mutations remains unclear, and there are no reports on ethambutol resistance from the Caribbean. We examined the sequence of embB in 57 distinct Multi-Drug Resistant (MDR) and non-MDR strains of Mycobacterium tuberculosis, mostly from Cuba and the Dominican Republic. embB306 codon mutations were found exclusively in MDR-TB, but in both ethambutol sensitive and resistant strains. Valine substitutions predominated in ethambutol resistant strains, while isoleucine replacements were more common in sensitive strains. Three ethambutol resistant MDR strains without embB306 substitutions had replacements in embB406 or embB497, but these were also found in ethambutol sensitive MDR strains. The results confirm previous findings that amino acid substitutions in EmbB306, EmbB406 and EmbB497 are found only in MDR-TB strains but in both phenotypically resistant and sensitive strains. One ethambutol resistant non-MDR strain did not have any embB mutation suggesting that other undefined mutations can also confer ethambutol resistance.

La relación entre resistencia a etambutol y mutaciones en embB no se ha establecido claramente y no existen comunicaciones sobre la resistencia a etambutol en cepas provenientes de países Caribeños. Se evaluó la secuencia del gen embB en 57 cepas de Mycobacterium tuberculosis multi-drogo resistentes (MDR) y no-MDR, la mayoría aislada en Cuba y República Dominicana. Se encontraron mutaciones en el codón embB306 exclusivamente en cepas MDR, tanto en cepas sensibles como resistentes a etambutol. Tres cepas MDR resistentes a etambutol, sin sustituciones en embB306, tenían mutaciones en los codones embB406 o embB497, pero estos cambios se encontraron también en cepas sensibles. Los resultados confirman otros estudios, mostrando que sustituciones aminoacídicas en EmbB306, EmbB406 y EmbB497 se encuentran exclusivamente en cepas MDR, tanto resistentes como sensibles a etambutol. Encontramos una cepa no MDR resistente a etambutol sin ninguna mutación en embB, sugiriendo que otras mutaciones aún no identificadas también pueden conferir resistencia a etambutol.

The direct detection of pyrazinamide resistance in Mycobacterium tuberculosis is not routinely performed in many laboratories in the world because the drug is active only at acid pH, which also affects the growth of M. tuberculosis. The pyrazinamidase enzyme, encoded by pncA gene, is necessary to convert prodrug pyrazinamide to its active form. Taking into account that nicotinamide, a structural analogue of pyrazinamide, converted in its active forms by the pyrazinamidase enzyme at a physiological pH does not affect bacterial growth, the aim of this research was to evaluate two colorimetric methods: Nitrate reductase and malachite green microtube assays, using nicotinamide to perform susceptibility testing in 102 M. tuberculosis strains. The results were compared with those obtained by the classic Wayne assay. Mutations in the pncA gene were identified by sequencing the pncA gene from all isolates in which pyrazinamide resistance was detected by any of the three methods. Both the nitrate reductase and malachite green microtube assays showed sensitivities of 93.75% and specificities of 97.67%. Mutations in the pncA gene were found in 14 of 16 strains (87.5%) that were pyrazinamide resistant.

Los estudios de susceptibilidad a PZA no se realizan de rutina debido a que el pH ácido requerido para lograr la actividad de la droga, afecta el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis. La PZA es convertida en su forma activa por acción de la enzima pirazinamidasa (PZAasa) que es codificada por el gen pncA. Tomando en consideración que la enzima PZAasa es la responsable de convertir la nicotinamida (NIC), droga análoga de la PZA, en su forma activa sin requerir de un pH ácido, nos propusimos evaluar dos métodos colorimétricos: Método de la Nitrato Reductasa (MNR) y Microensayo Verde Malaquita (MVM) para conocer la susceptibilidad de 102 cepas de M. tuberculosis a la PZA empleando la NIC. Los resultados se compararon con el Ensayo Enzimático de Wayne (método de referencia). A las cepas resistentes y las que mostraron resultados discordantes, se les secuenció el gen pncA. Se alcanzó una sensibilidad del 93.75% y una especificidad del 97.67% para el MNR y el MVM. El 87.5% de las cepas resistentes (14/16) mostraron mutaciones en el gen pncA.

The protective efficacy of current Tuberculosis vaccine (BCG) against pulmonary tuberculosis and reactivation is variable and inefficient. This is the reason of the urgent search of new prophylactic alternatives for disease control. Different strategies using Mycobacteriun tuberculosis auxotrophic mutants, recombinant BCG or non-tuberculous micobacteria are carried out taking advantage of the use of live vaccines. Experimental evidences demonstrate protection conferred by the vaccination with live, inactivated or protein fraction of Mycobacterium ´habana ´ TMC-5135. Protection seems to be related to few virulence signs in animal models. Experimental results place M. ´habana ´ among vaccine candidates against tuberculosis meeting the condition of a ¨classic¨ vaccine to mimic natural infection as close as possible inducing strong immune protective response without causing extensive disease.

La eficacia protectora de la actual vacuna (BCG) contra la tuberculosis, para contrarrestar las formas pulmonares de esta enfermedad y su reactivación, resulta variable o poco eficiente, lo cual impone la búsqueda urgente de nuevas alternativas profilácticas contra esta enfermedad. Basados en las ventajas inmunogénicas que ofrece el uso de vacunas vivas, se han encaminado diferentes estrategias de este tipo empleando mutantes auxotróficos de Mycobacterium tuberculosis , BCG recombinante o micobacterias no tuberculosas. Existen evidencias experimentales acerca de la protección conferida tras la vacunación con cepas vivas, inactivadas o fracciones proteicas de Mycobacterium'habana' TMC-5135 contra la infección por Mycobacterium tuberculosis. Esta respuesta protectora parece ir aparejada de escasos signos de virulencia en los modelos animales ensayados, lo cual coloca a M.´habana´ dentro de los posibles candidatos vacunales contra la tuberculosis al ajustarse a la condición que impone una vacuna clásica de reproducir la infección y los eventos inmunes que le suceden lo más fielmente posible a como ocurren de manera natural, sin causar extensos daños en el receptor.

OBJECTIVE: Determine the prevalence of resistance to antitubercular drugs in Cuba in the 2000-2009 decade. METHODS: A prospective longitudinal study was conducted. The sample group consisted of 2  285 Mycobacterium tuberculosis isolates obtained from throughout the country in the period from 1 January 2000 to 31 December 2009. The proportion method was used in Löwenstein-Jensen media with the first-line drugs: isoniazid, streptomycin, ethambutol, and rifampicin. RESULTS: In the new cases and patients with a history of previous treatment, resistance was 8.5% and 37.0%, respectively. In these case categories, multidrug resistance was 0.4% and 8.8%, respectively. CONCLUSIONS: This study shows low prevalence of multidrug-resistant strains in Cuba. The results reflect the progress made by the national control program, which is currently working on the elimination of tuberculosis as a public health problem in the country.

OBJETIVO: Determinar la prevalencia de la resistencia a los fármacos antituberculosos en Cuba en el decenio 2000-2009. MÉTODOS: Se realizó un estudio prospectivo longitudinal. El universo de trabajo estuvo constituido por un total de 2 285 aislamientos de Mycobacterium tuberculosis obtenidos de todo el país en el período comprendido entre el 1 de enero de 2000 y el 31 de diciembre de 2009. Se empleó el método de las proporciones en medio Löwenstein-Jensen con los fármacos de primera línea: isoniazida, estreptomicina, etambutol y rifampicina. RESULTADOS: La resistencia entre los casos nuevos y los pacientes con antecedente de tratamiento previo fue de 8,5% y 37,0%, respectivamente; para estas mismas categorías de caso, la multirresistencia fue de 0,4% y 8,8%, respectivamente. CONCLUSIONES: El presente estudio muestra baja prevalencia de cepas multirresistentes en Cuba. Estos resultados reflejan los avances logrados por el programa nacional de control, que trabaja en la actualidad hacia la eliminación de la tuberculosis como problema de salud pública en el país.

Currently, lipid antigens of mycobacteria are attractive targets for the development of new tuberculosis vaccinal formulations. A lipid extract of Mycobacterium smegmatis cell wall was characterized using a Thin Layer Chromatography and Dot blot with human gammaglobulin. Mainly we identified the presence of phospholipids and micolic acids in the lipid extract showing a high recognition by human gammaglobulin. These results indicate the relevance of continuing immunoprotection studies with mycobacterial lipid antigens.

En la actualidad, los antígenos lipídicos de las micobacterias constituyen blancos atractivos para el desarrollo de nuevas formulaciones vacunales contra la tuberculosis. En nuestro trabajo se realizó la caracterización parcial de un extracto lipídico de pared celular de Mycobacterium smegmatis mediante cromatografía de capa delgada y Dot blot frente a gammaglobulina humana. Se identificó, fundamentalmente, la presencia de fosfolípidos y ácidos micólicos en el extracto lipídico y se observó un elevado reconocimiento de los mismos por la gammaglobulina humana, lo cual indica la importancia de continuar los estudios de inmunoprotección empleando antígenos lipídicos de micobacterias.

Con la aparición del Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH), la tuberculosis ha tenido un significativo aumento, se ha planteado que esta coinfección es denominada como el "dúo mortal": uno acelera el avance de la otra y viceversa, por lo que cada día su temprano diagnóstico se hace más necesario. El objetivo de nuestro trabajo fue analizar, en el periodo de enero 2000 a diciembre 2006, la positividad en el diagnóstico bacteriológico de Mycobacterium tuberculosis en pacientes sintomáticos, incluyendo los pacientes VIH+/SIDA tratados en nuestra Institución Hospitalaria. Las muestras estudiadas fueron procesadas por las técnicas establecidas para el diagnóstico convencional; examen directo, examen de cultivo, e identificación. Mycobacterium tuberculosis solamente fue aislado de un total de 8151 muestras analizadas, en 205 muestras para un 2.5% de positividad; conjuntamente a las cepas identificadas se les realizó estudios de resistencia y/o sensibilidad por el método de Canetti, donde no se encontró cepas resistentes a ninguna de las drogas antibacilares empleadas, por lo que afirmamos que estudios como éste son imprescindibles para la vigilancia epidemiológica de esta enfermedad. Los resultados obtenidos muestran que la asociación VIH/SIDA/TB en nuestro país ha evolucionado en forma lenta, el incremento no es comparable con los reportados en la literatura internacional, demostrando la eficiencia de los Programas Nacionales de Control establecidos para estas dos enfermedades.

Favored by the appearance of the human immunodeficiency virus (HIV), tuberculosis has significantly increased. It has been stated that TB and HIV make a lethal partnership: one accelerating the advance of the other and viceversa; that iswhy early diagnosis of TB has become so important. This paper is aimed at analysing the positivity of the bacteriological diagnosis of Mycobacterium tuberculosis in our laboratory, from January 2000 to December 2006, in symptomatic patients, including HIV+ patients receiving treatment in our institution. All samples studied were processed by conventionaldiagnostic techniques, direct examination as well as by culture and identification tests. A total of 8151 samples were analysed, but Mycobacterium tuberculosis was isolated in only 205 of those samples for a 2,5% of positivity. Susceptibility test, through Canetti’s method, was applied to the strains isolated; no resistant strains to any of the antitubercular drugs used were observed. This fact makes us state that these types of studies are extremely important for the epidemiological surveillance of this disease. Results obtained show that the HIV/AIDS/TB association in our country has evolved slowly and that its increase is not comparable to that reported in the international literature, this show the efficient of the two National Control Programs for this diseases.

Feasibility of rapid and sustainable diagnostic methods that provide useful and timely results to guide the clinical control of tuberculosis patients was analyzed. However, policies guiding the insertion of new diagnostics in the laboratory services that support the tuberculosis control are lacking in developing countries. The introduction of these methods in developing countries laboratories requires rational policies guiding the application of these technologies. In the last few years, some automated systems for culture and molecular testing in laboratory services for tuberculosis diagnosis, which offered accuracy and speed, have been reported. However, their implementation is restricted because of costly resources, logistics and infrastructure. Recently, various economically feasible tests have demonstrated to be applicable in poor-resource labs. The detection of adenosine desaminase (ADA) in pleural fluid is a valuable low-cost approach to the diagnosis of tuberculosis. On the other hand, the microscopic detection of Mycobacterium tuberculosis using thin layer agar is a moderate cost alternative method. Drug susceptibility testing to antituberculous drugs can be expedited by the nitrate reduction assay in tuberculosis laboratories using routine procedures for tuberculosis diagnosis.

Se analizó la factibilidad de utilizar métodos de diagnósticos rápidos que sean sustentables en Latinoamérica, los cuales brindan resultados oportunos y útiles para orientar el control clínico de pacientes con tuberculosis. La introducción de estos métodos en los laboratorios de los países en vías de desarrollo requiere una política racional que guíe la incorporación y aplicación de esta tecnología. En los últimos años, se han reportado sistemas automatizados para los cultivos y métodos moleculares para el diagnóstico de tuberculosis que han aportado precisión y rapidez. Sin embargo, su implementación está limitada porque dependen de costosos recursos, equipos e infraestructura de laboratorio. Recién se han desarrollado diferentes técnicas que han demostrado ser económicamente factibles de aplicar en laboratorios de escasos recursos. La detección de la enzima adenosina-desaminasa (ADA) en líquido pleural tiene un bajo costo y permite realizar el diagnóstico de tuberculosis. Por su parte, la detección microscópica de Mycobacterium tuberculosis mediante el método de agar en placa delgada tiene un costo moderado y constituye un método alternativo. El método de nitrato reductasa para la detección de resistencia a las drogas antituberculosas, acelera la obtención de resultados en los laboratorios que utilizan técnicas convencionales para el diagnóstico de tuberculosis.

Las micobacterias no tuberculosas son patógenos oportunistas capaces de producir infecciones pulmonares y extrapulmonares. El aumento de su incidencia se ha acelerado después de la aparición del Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). En este trabajo se estudiaron 40 cepas aisladas de pacientes infectados por el Virus de Inmunodeficiencia Humana, A los aislamientos con significación patogénica se le aplicó el estudio de los patrones de las fracciones de ácidos micólicos. Los resultados fueron: 9 Mycobacterium avium, 8 Mycobacterium fortuitum, 4 Mycobacterium flavescens, 4 Mycobacterium smegmatis, 3 Mycobacterium marinum, 4 Mycobacterium gastri, 2 Mycobacterium gordonae, 2 Mycobacterium chelonae, 1 Mycobacterium xenopi, 1 Mycobacterium phlei, 1 Mycobacterium triviale, y 1 Mycobacterium malmoense. Sólo 5 de estas cepas estaban asociadas a cuadros clínicos: 2 Mycobacterium avium (micobacteriosis diseminada y renal respectivamente), 1 Mycobacterium gordonae (lesiones en piel), 1 Mycobacterium fortuitum (linfadenitis submaxilar), 1 Mycobacterium malmoense (linfadenitis submaxilar). Las especies más frecuentemente aisladas fueron M. avium y M. fortuitum acorde con lo revisado en la literatura. La aplicación simultánea de las técnicas convencionales y el estudio de las fracciones de ácidos micólicos ha permitido obtener resultados más confiables por lo que recomendamos su aplicación en estos estudios.

Non tuberculosis mycobacteria are opportunist pathogens whose frequency in human infections has increased after the appearance of the Acquired Immunodefficiency Syndrome (AIDS). In this work we studied 40 strains isolated from patients infected by the Human Immunodefficiency Virus and isolates with pathogenic significance were further analyzed for diagnostic confirmation by the method that studies mycolic acid fractions. After identification, the results were: 9 Mycobacterium avium, 8 Mycobacterium fortuitum, 4 Mycobacterium flavescens, 4 Mycobacterium smegmatis, 3 Mycobacterium marinum, 4 Mycobacterium gastri, 2 Mycobacterium gordonae, 2 Mycobacterium chelonae, 1 Mycobacterium xenopi, 1 Mycobacterium phlei, 1 Mycobacterium triviale, and 1 Mycobacterium malmoense. Only five of these strains were associated to clinical symptoms: 2 Mycobacterium avium (disseminated and renal mycobacteriosis respectively), 1 Mycobacterium gordonae (skin lesions), 1 Mycobacterium fortuitum (submaxilar lymphoadenitis), and 1 Mycobacterium malmoense (submaxilar lymphoadenitis). The species most frequently isolated were: M. avium and M. fortuitum, in agreement with a bibliographic revision. The simultaneous application of conventional techniques and the study of mycolic acid allowed us to obtain more trustworthy results.

L a vigilancia de la resistencia a fármacos a través del cultivo y de las pruebas de susceptibilidad in vitro permite conocer la magnitud regional y mundial de la resistencia en tuberculosis. En el presente trabajo se determinó la prevalencia de la resistencia a fármacos antituberculosos en Cuba, durante el periodo 1995-1998 en casos nuevos y en aquéllos que han recibido tratamiento previo. Los resultados incluidos en este estudio forman parte de los dos proyectos mundiales organizados por la OMS/UICTER. La resistencia a los medicamentos se evaluó usando el método de las proporciones en 1.379 cepas de Mycobacterium tuberculosis a los fármacos de primera línea (isoniacida, rifampicina, estreptomicina y etambutol). La resistencia en casos nuevos fue del 8,3% y 6,5% y la resistencia múltiple a fármacos ( multidrug-resistance, MDR) fue del 0,7% y 0% en el primer y segundo estudio, respectivamente. Estos resultados permitieron demostrar la escasa circulación de cepas MDR en Cuba; se reconoció a nivel mundial el buen funcionamiento del Programa Nacional de Control y el éxito de la aplicación en nuestro país de la estrategia del tratamiento estrictamente supervisado desde 1971

Surveillance of resistance of Mycobacterium tuberculosis to anti-TB drugs in Cuba, 1995-1998 Drug-resistance surveillance by means of culture and drug susceptibility test (DST) allows the estimation of the regional and global magnitude of multidrug-resistance (MDR). Two reports on anti-tuberculosis drug resistance by the WHO/IUATLD showed that drug-resistance TB varied widely across regions. Thecurrent study determined the prevalence of drug resistance among new cases and among previously treated cases of tuberculosis in Cuba during the period 1995-1998. Using the proportion method, drug resistance was determined in 1,379 Mycobacterium tuberculosis strains to four front-line anti- tuberculosis drugs (isoniazid, streptomycin, ethambutol and rifampicin). In two separate studies, the overall resistance in new cases was 8.3% and 6.5%, and the MDR was 0.7% and 0%, respectively. The Cuba data demonstrated that Colombia, in comparison, is relatively free of MDR strains, indicating effective tuberculosis control programs in Colombia and the success of the direct observation-treatment strategy that has been in continuous use since 1971

We report the first Cuban case of mycobacteriosis caused by Mycobacterium malmoense in an HIV infected patient who developed submandibular ulcerative adenopathies. Culture of clinical samples yielded a non-pigmented, slowly growing mycobacteria strain that was classified in the Runyon Group I. The identification was complemented by biochemical tests and analysis of mycolic acid fractions

Se reporta el primer caso cubano de micobacteriosis causada por Mycobacterium malmoense en un paciente infectado por el virus de inmunodeficiencia humana (VIH), el cual presentaba adenopatías ulcerativas submandibulares. A partir de las muestras tomadas de las lesiones ulceradas, se aisló una cepa de micobacteria no pigmentada de crecimiento lento, perteneciente al grupo I de Runyon, posteriormente fue clasificada por test bioquímico y por el análisis de las fracciones de ácidos micólicos, como Mycobacterium malmoense